细胞培养

细胞培养过程中即使我们再小心翼翼，还是会在不经意间出现细胞污染的情况，导致实验无法继续进行，可能是准备已久的实验，一下子又回到了起点。本期就细胞污染的常见类型简单向大家介绍一下。

实验室细胞培养过程中的污染物主要有两大类：化学污染和生物污染物。

一、化学污染

主要有培养基、PBS、血清和胰酶等试剂中的杂质，内毒素，洗涤剂残留等。因此许多试剂在使用前需要过滤，清洗的物品一定要用超纯水多清洗几次并高温高压灭菌后使用。

二、生物污染

01 细菌污染

主要有白色葡萄球菌，大肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等；细胞被污染后培养基会很快变黄变浑浊，在显微镜下可观察到细胞间有细小菌体移动，在数小时内会出现细胞脱落漂浮，培养液中呈细沙状。这种污染通常是操作不规范或无菌措施不到位等引起的。

02 霉菌污染

常见的有白念珠菌、酵母菌、黑曲霉、孢子菌等；细胞污染后可明显观察到呈现串珠状的白色或黄色漂浮物，显微镜下可见絮状交错的菌丝或串珠状的透明菌团生长在细胞之间，污染速度较慢，培养基依旧清澈，后期会在细胞间出现很多清晰珊瑚状物，逐渐会长出黑色丝状物。这种污染通常也是操作不规范或无菌措施不到位等引起的。

03 支原体污染

细胞被支原体污染后，培养液可不发生浑浊，短期内细胞没有明显的病理变化，细微变化也可由于传代、换液而被缓解，因此不易被发现。只有当污染严重时才影响细胞增殖，甚至从培养器皿脱落。支原体可以与宿主细胞形成一个共生关系，使污染不断扩大。主要来源于是已感染支原体细胞之间的交叉污染，支原体感染的血清和胰酶等。在情况较轻时可使用支原体清除剂。

04 黑胶虫污染

污染后培养液不会浑浊，在高倍镜下可观察到细胞间有黑色颗粒在原地进行“布朗运动”，像小虫游来游去。随着污染加重，被污染的细胞生长缓慢，细胞状态差，空泡化严重，甚至还可能导致细胞形态的改变。污染源主要来自于血清，如果出现污染，更换血清。

05 病毒污染

被污染的细胞不会产生形态变化及细胞病理现象，培养液清澈不混浊，少部分病毒会造成细胞变圆、肿胀，脱落。病毒可能来源于血清。

06 细胞交叉污染

在显微镜下可观察到部分细胞形态与所培养的细胞形态有明显差异，可能是两种或两种细胞以上的实验同时进行，操作不当，使实验耗材、试剂等混用而易造成的污染。

细胞培养中每次出现污染，不仅要丢弃污染的细胞、检查各种试剂，还需要对培养箱进行彻底的杀菌消毒，我们致力研发的二氧化碳细胞培养箱配备高温灭菌功能（可选“湿热灭菌”），接近过度灭杀（1012）的标准要求，欢迎咨询。