细胞培养流程主要分为：细胞复苏、细胞传代、细胞冻存

上一期已经向大家介绍了细胞复苏的相关内容，这一期我们一起来了解一下关于细胞传代的相关内容。

一、什么是细胞传代？

细胞在培养皿中生长一定的时间后，达到对数生长期，被分开接种到新的培养器皿中继续生长或做实验。

二、细胞传代的具体操作步骤

贴 壁 细 胞

01 从培养箱取出细胞培养瓶（一般选择处于对数期的细胞），转移到超净台。弃去原有培养液，用1-2mL PBS缓冲液洗涤1次（注意从侧壁加入，以免冲掉细胞），弃去PBS缓冲液。

02 向培养瓶中加入1mL胰酶，消化，将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆且大量脱落时，转移到超净台。

03 加入2mL完全培养基，终止消化。用移液器充分缓慢吹打，使细胞能够完全脱落。然后将细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm/min离心5分钟，转移进超净台，打开盖子，弃去上清。

04 用1mL完全培养基重悬细胞团块，制备细胞悬液，然后将细胞悬液分装进2个（或多个）含有4mL完全培养基的细胞培养瓶中，盖上瓶盖混匀。

05 将细胞培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

悬 浮 细 胞

01 从培养箱取出细胞培养瓶（一般选择处于对数期的细胞），转移到超净台。用移液器将细胞培养瓶中的细胞液转移至15mL离心管中，1000rpm/min离心5分钟，转移进超净台，打开盖子，弃去上清。

02 用1mL完全培养基重悬细胞团块，制备细胞悬液，然后将细胞悬液分装进2个（或多个）含有4mL完全培养基的细胞培养瓶中，盖上瓶盖混匀。

03 将细胞培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

注意事项

1. 实验过程中每次将物品拿进超净台中前，一定要向其喷洒75%酒精消毒，或用酒精棉球擦拭，防止污染,实验全程无菌操作。

2. 适度消化：细胞消化的时间主要取决于消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要加入含有血清的培养基立即终止消化。